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色譜柱使用過程中下列情況遇到過嗎?

點擊次數(shù):1899 發(fā)布時間:2021-08-16
  色譜柱使用過程中下列情況遇到過嗎?
  利用色譜柱將混合物分離,然后利用檢測器依次檢測已分離出來的組分。色譜柱的直徑為數(shù)毫米,其中填充有固體吸附劑或液體溶劑,所填充的吸附劑或溶劑稱為固定相。與固定相相對應(yīng)的還有一個流動相。流動相是一種與樣品和固定相都不發(fā)生反應(yīng)的氣體,一般為氮或氫氣。待分析的樣品在色譜柱頂端注入流動相,流動相帶著樣品進(jìn)入色譜柱,故流動相又稱為載氣。載氣在分析過程中是連續(xù)地以一定流速流過色譜柱的;而樣品則只是一次一次地注入,每注入一次得到一次分析結(jié)果。
  在色譜柱實驗過程中經(jīng)常遇到的情況:
  (1) 的色譜柱,直接上分析條件來分析樣品,發(fā)現(xiàn)分離情況不穩(wěn)定。
  (2) 的色譜柱,使用中發(fā)現(xiàn)壓力突然升。
  (3) 的色譜柱,發(fā)現(xiàn)分離度、保留時間發(fā)生了變化。
  (4) 色譜柱使用不頻繁,一開始分析樣品效果比較好,但是,在使用過程中發(fā)現(xiàn)柱效下降快、峰形異常的情況。
  (5) 色譜峰形異常,基線不穩(wěn)。
  當(dāng)發(fā)生以上情況,請仔細(xì)檢查,是否有某個操作疏忽了?
  1)測試柱性能
  通常情況下,我們建議用戶在拿到色譜柱后,件事情就是在一臺性能完好的儀器系統(tǒng)上,按照廠家說明書對色譜柱進(jìn)行柱效測試。其實,對于一個合格的色譜分析工作者來說,拿到一根色譜柱,要開始一個課題之前,都會這樣做,目的有二:1、了解色譜柱之前的情況并判斷色譜柱是否正常。2、將檢測結(jié)果小心保存, 當(dāng)實驗過程中發(fā)現(xiàn)異常時,在檢測柱效進(jìn)行對比,來進(jìn)一步排查原因。
  2)當(dāng)反相使用濃度緩沖鹽時,注意過渡
  在使用濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑時,一定要注意應(yīng)用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下,否則緩沖液中的鹽在濃度的有機相中容易析出,造成系統(tǒng)堵塞。另外,在發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)壓力升異常時,要仔細(xì)檢查,段段排除包括保護(hù)柱、混合器、管路或者流通池等。
  3)當(dāng)更換色譜柱時,原來的實驗情況發(fā)生變化
  首,如果之前開發(fā)方法時色譜柱已經(jīng)做過別的樣品,那么之前的樣品或使用的流動相對這個樣品分析可能有干擾,只能重找條件。建議:開發(fā)方法時使用的色譜柱。(其次,如果是更換了品牌發(fā)生這樣的情況,可能是由于不同品牌的鍵合技術(shù)不同,造成了選擇性的細(xì)微差異 ,需要調(diào)整條件,并再次確定出峰順序(有些樣品的洗脫順序會改變)。再次,如果是更換了同品牌型號的的色譜柱發(fā)生這種情況,請檢查之前分離時目標(biāo)與雜質(zhì)的分離度是否符合要求(Rs大于1.5),如果一開始只是勉分開(Rs小于1.5),那只能說明方法沒有化好,需要再次進(jìn)行化。
  4)樣品及前處理
  樣品要盡可能清潔,可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱(SPE)對樣品進(jìn)行預(yù)處理;若樣品不便處理,要使用保護(hù)柱。流動相中所使用的各種有機溶劑要使用色譜純,配流動相的水應(yīng)該是純水或雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾一次則較好,尤其是含鹽的流動相。另外,裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
  5)色譜柱基線問題
  通常情況,基線問題是由于系統(tǒng)或者流動相引起的,和色譜柱關(guān)系不大。

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